寵物飼料中的真菌毒素：14分鐘快速檢測，讓你的毛茸夥伴吃得安心

真菌毒素（Mycotoxin） 是由某些真菌在生長繁殖過程中產生的次生代謝產物，可對人類和動物的健康造成各種不良影響。目前已知的真菌毒素大約有300多種，其中具有代表性的包括黃曲黴毒素、去氧雪腐鐮刀烯醇、展青黴素、赭曲黴毒素、玉米赤黴烯酮、伏馬毒素等。這些真菌毒素首先會廣泛汙染農作物、糧油及其制品等，再遷移至以此為原料的動物或寵物飼料，如果飼料出現了真菌毒素的感染，寵物在食用飼料後就會出現反胃、免疫力下降甚至癌變等不良後果。

為了確保寵物飼料安全，農村農業部在2018年釋出了20號公告（寵物飼料管理方法）， 其中LC-MS/MS標準檢測方法NY/T 2071，NY/T 1970，SN/T 3136均采用了沃特世串聯四極桿質譜 。隨著相關研究的不斷推進，更多種類的真菌毒素在飼料中被發現，同時越來越多的證據表明其它真菌毒素也具有相同甚至更強的健康危害。為了盡可能降低真菌毒素的影響，相關企業和機構對於更多種類的真菌毒素檢測需求大幅增加。因此，為了滿足日益增長的檢測需求，本研究開發出一種 快速檢測寵物飼料中43種真菌毒素 的方法。

方法優勢

樣品前處理

將準備好的待檢測樣本進行提取。稱取5.0 g樣品粉末於50 mL離心管中，再加入20 mL提取液（含有1%乙酸的80%乙腈-水溶液），渦旋提取30 min。之後對其進行離心（2,000 rpm, 10 min），取上清液500 μL加500 μL純水進行稀釋並用濾膜過濾後， 進行UPLC-MS/MS分析。

LC及MS條件

LC條件

色譜系統：ACQUITY UPLC I- class PLUS

色譜柱：ACQUITY Premier HSS T3 (2.1 x 100 mm, 1.8 μm, P/N: 186009468 )

流動相A:1 mM甲酸銨水溶液，含0.1%甲酸

流動相B：甲醇，含0.1%甲酸

進樣體積：3 μL

流速：0.40 mL/min

梯度：

MS條件

質譜系統：Xevo TQ-S Cronos

游離模式：ESI+/-(正負極性切換)

毛細管電壓：+2.5/-2.5 kV

錐孔氣流速：50 L/h

脫溶劑氣溫度：550 ℃

離子源溫度：150 ℃

化合物MRM方法如下表：

*：表示定量離子

實驗結果與討論

下圖為43種真菌毒素總離⼦流⾊譜圖。

圖1. 43種真菌毒素TIC圖。

回收率

以實際樣品中濃度加標（20 µg/kg）樣品計算回收率。43種真菌毒素，除渥曼青黴素、伏馬毒素及玉米赤黴醇回收率低於60%以外，其余化合物回收率均超過60%，可完全滿足高通量測定需求。如表1為各化合物回收率結果。

表1. 各化合物中濃度加標回收率結果。

最低定量限、線性及重現性

各化合物最低定量限（指S/N>10）遠遠優於現行監管標準要求，如恩鐮孢菌素A及B定量限低於0.05µg/kg，黃曲黴B1、黃曲黴G1定量限低至0.1 µg/kg，黃曲黴B2、黃曲黴G2定量限低至0.2 µg/kg。絕大部份真菌毒素定量限在2至5 µg/kg以下，除了串珠鐮刀菌毒素、β-玉米赤黴烯醇、α-玉米赤黴烯醇、β-玉米赤黴醇及α-玉米赤黴醇在10至20 µg/kg之間。

43種真菌毒素在基質中線性表現良好， 線性相依系數R均大於0.995 。

采用1 ppb基質匹配樣品，連續進樣10針，透過4種黃曲黴考察方法及儀器穩定性，結果顯示4種黃曲黴連續10針，RSD<5.3%。

實驗結果與討論

本套用采用了一種簡單、快速、高通量的前處理方法，實作了對寵物飼料樣品中43種真菌毒素的測定。與傳統標準檢測方法相比，該方法 通量更高、時間更快、成本更低 。得益於優異的UPLC-MS/MS分離能力及靈敏度，即使在大幅稀釋了樣品提取液的情況下，依然能夠獲得相當低的定量限，滿足現行檢測。

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