寵物風味劑 是根據寵物不同生長階段的采食習性和生理特征，特別設計的一種能引誘寵物采食，提高寵物適口性，增加寵物食欲而添加到基礎糧食中的非營養性添加劑(易建華等，2016)。寵物風味劑多以動物肌肉組織或內臟為主要原料，用適當的蛋白酶水解使動植物蛋白水解成肽或胺基酸等小分子物質，添加一定量的還原糖、胺基酸等其他輔料，在加熱條件下發生美拉德反應，制得風味濃厚的風味劑產品(孔淩等，2014)。
常用的蛋白水解物有水解動物蛋白和水解植物蛋白。水解植物蛋白制得的肉味香精風味較差，水解動物蛋白產生的肉香味逼真，因此成為目前較為常用的美拉德反應基質(李超，2013)。雞肝、雞腸、雞肉等雞肉味動物原料蛋白質含量高，胺基酸種類豐富，且資源豐富，可作為蛋白質受質。水解之後的雞肉味水解蛋白中含有豐富的胺基酸和多肽類核苷酸類物質，這些呈味物質可使寵物風味劑的整體香味理想、濃郁(曹秋梅等，2022)。李佳怡等(2022)以雞肉、雞心、雞肝(品質比為1：2：1)為主要原料制備適合犬類的誘食劑具有肉香味和烘烤香，可引起寵物犬的興趣。孔淩等(2018)對雞肝及雞下腳料的生物酶解，透過美拉德反應獲得了肉腥香風 味，耐高溫性好的寵物誘食劑。將雞肉味動物原料套用於制備寵物風味劑不僅可以提高肝臟類副產物的利用率，還能夠提高飼料適口性及飼料利用率和消化率。
本研究分別采用 雞肝、雞腸、雞肉 的水解蛋白作為蛋白質受質，透過美拉德反應制備寵物風味劑。利用高效液相色譜法測定三種風味劑的分子品質分布，采用全自動胺基酸分析儀測定三種風味劑的遊離胺基酸含量，用氣相色譜-質譜聯用儀(GC-MS)對三種風味劑的揮發性風味物質進 行定性及定量，從而對其風味特征及關鍵風味成分進行分析，旨在為新型寵物風味劑的開發提供理論參考。
0 1
材料與方法
1.1 材料與儀器
雞肝、雞腸、雞肉；葡萄糖、木糖、半胱胺酸、甘胺酸、維生素B1；蛋白酶、風味酶、酵母水解物。
pH計；數顯恒溫水浴鍋；高效液相色譜儀；胺基酸分析儀；氣相色譜-質譜聯用儀(GC-MS)。
1.2 試驗方法
（1）寵物風味劑的制備
將雞肝、雞腸、雞肉解凍預處理後，用絞肉機絞成泥狀，分別稱取絞好的肉糜150g，加入相應比例的水勾漿，升溫至適宜的溫度，調節pH至6.5，添加一定量的蛋白酶和風味酶後置於水浴中恒溫攪拌，水解時間2h，將酶解液置於沸水浴中酶滅活30min。準確稱取一定量的葡萄糖、木糖、酵母水解物、半胱胺酸、甘胺酸、維生素B1加入到酶解液中混勻，將燒杯置於95℃水浴中進行美拉德反應一定時間，取出冷卻即可得到寵物風味劑A、B、C。 風味劑A、B、C分別為雞肝、雞腸、雞肉 作為美拉德反應蛋白質受質。
（2）測定 肽分子品質分布、 遊離胺基酸、 GC-MS檢測 風味劑。
0 2
結果與分析
2.1 肽分子品質分布
肽分子品質分布是美拉德反應的重要表征指標之一，風味劑的呈味特性與其所含的小分子肽具有密切關系(侯鈺柯等2022)。本試驗不同雞肉味蛋白受質制備的寵物風味劑的肽分子品質分布結果如圖1所示。
三種風味劑的分子品質分布以≤180 Da和180~400 Da為主，風味劑A分別占41.91%和31.65%；風味劑B分別占33.11%和34.43%；風味劑C分別占25.73%和28.42%。可以看出，風味劑A中≤180 Da的分子品質含量較高，主要為遊離胺基酸。這可能與美拉德反應中肽分子品質組分會產生交聯作用有關，另外，還可能是因為還原糖與蛋白質的熱反應過程中，蛋白肽發生熱降解(陳曉，2020)。
三種風味劑的分子品質基本<1000 Da。徐欣如(2019)報道，呈現鮮味、濃厚感，或鮮味、濃厚感增強作用的肽，其分子品質大多小於1000 Da，該肽段的美拉德反應活性最強。其中，風味劑B分子品質<1000 Da肽段的含量較其他兩種風味劑高，可能具有更多的呈味物質，該結果在CC-MS分析結果中得到了證實。美拉德反應中大分子多肽的產生主要來源於熱分解(Nagai等，2019)。風味劑A、B、C中＞2000 Da 的分子品質分布分別為5.79%、4.54%、6.92%。該肽段中風味劑C的含量相對高，可能是因為風味劑C中低分子品質肽的交聯和美拉德反應最後階段類黑素的產生。
2.2 遊離胺基酸
遊離胺基酸在風味劑體系中是重要的滋味成分，同樣是香味的前體物質，能與其他成分協同作用，從而影響體系風味(Song等2019)。不同雞肉味蛋白受質制備的寵物風味劑的遊離胺基酸含量差異如表1所示。
三種風味劑中檢測出17種遊離胺基酸，按滋味分為鮮味胺基酸、甜味胺基酸、苦味胺基酸和含硫胺基酸。三種風味劑A、B、C遊離胺基酸總量分別為4.97、4.44、4.48 g/100g。
風味劑A的遊離胺基酸總量高於其他兩種風味劑，可能是由於蛋白質含量的差異，酶的作用下使雞肝蛋白裂解，遊離胺基酸含量高(陳曉，2020)。 風味劑A中鮮味胺基酸和甜味胺基酸高於其他兩種風味劑 ，說明其鮮味物質含量相對高，鮮味物質不但可以產生鮮 味，而且還可以增加風味劑的醇厚感、層次感的香味(胡龍騰，2022)。
甜味胺基酸可能與美拉德過程中涉及到的Strecker降解、羰氨反應和肽降解等反應有關。此外，風味劑C的苦味胺基酸含量最高，苦味胺基酸通常不具備味覺活性。苯丙胺酸和酪胺酸是苦味胺基酸也是芳香族胺基酸，當芳香族胺基酸閾值高於含量時，可以提高風味劑的鮮味和甜味。三種風味劑A、B、C含硫胺基酸含量分別為0.72、0.98、0.91 /100g，其中風味劑B中的含硫胺基酸含量最高。含硫胺基酸如半胱胺酸是形成肉香味的必需成分，因此 風味劑B中的肉香味可能會較濃郁 。美拉德反應時，以胺基酸或小分子肽為反應物與還原糖反應，會產生香味物質，而加入半胱胺酸則能增加食物中的肉味。
2.3 GC-MS分析
三種風味劑中，揮發性風味成分含量風味劑B＞風味劑C＞風味劑A。風味物質的產生是由於肽鏈上遊離的胺基或遊離胺基酸的胺基與木糖的羰基反應生成。在風味劑A中酸類是主要的揮發性風味成分。風味劑B中醇類和醛類是主要的揮發性風味成分，其次是酸類和環類。在風味劑C中烴類和酸類是主要的揮發性風味成分，其次是醛類和環類。由此可以得出，
不同的雞肉味酶解受質制備的寵物風味劑的揮發性風味成分含量組成差異較大
，可能是酶解受質中脂肪、蛋白質含量的差異導致。
從三種風味劑中共檢測出78種香味物質，從風味劑A、B、C中分別鑒定出38種、41種和43種物質，其中醛類、醇類、酸類物質的種類較多，其次是環類和烴類。
醛類是脂肪氧化所形成的小分子產物，可以透過美拉德反應獲得。含有6~10個碳的醛類物質包括已醛、辛醛、壬醛、2-辛稀醛、癸醛和 2-壬烯醛等，其對肉香味的形成具有重要的貢獻，這些醛類化合物具有脂肪味、牛油味和清香，有助形成熟肉中的脂肪風味(李超，2013)。風味劑B中均含有這些香味物質，而風味劑A和風味劑C中僅能檢測到壬醛。 風味劑B含有多種醛類物質且含量較高，說明其呈現出濃郁的肉香味、脂肪味，並且比風味劑A和風味劑C明顯 。糠醛是具有燒烤味的典型醛類，對產品氣味有明顯的促進作用(陳雪梅，2015)。風味劑B中未檢測出，而風味劑A和風味劑C均可檢測到，含量分別為3.78、8.64 ng/g，說明風味劑A和風味劑 C具有輕微燒烤味。
醇類一般是脂肪酸的二次過氧化物所得到的降解產物。風味劑B中含有的醇類物質較多，且含量比其他兩種風味劑高。三種風味劑中均檢測出糠醛、苯甲醇和苯乙醇，風味劑B含量最高，其中糠醇具有焙烤香，是肉香的重要來源，苯甲醇和 苯乙醇呈現出甜香和花香。此外，風味劑B還含有1-辛烯-3-醇、2-辛烯醇等能呈現愉悅的蘑菇香味，是寵物風味劑中的標誌性呈味物質。據報道，貓對具有脂肪味、菇味的產品存在一定偏好。
雜環類物質包括呋喃、噻唑、吡嗪類等，主要來自於美拉德反應，是寵物風味劑中形成肉類風味的重要成分。3種風味劑中均含有2-乙酰基吡咯、4-甲基-5-(beta-羥乙基)噻唑、吲哚，分別呈現出堅果味、肉香味和焙烤味，含量風味劑B＞風味劑C＞風味劑A。此外，2-戊基呋喃是氧化脂質中重要的雜環化合物，主要呈現水果香味，僅在風味劑A和風味劑C中檢測出。結果表明 風味劑B主要以肉香味、焙烤味為主，且較其他兩種風味劑濃郁 ，該結果與上述遊離胺基酸含量的結果相一致。風味劑A和風味劑的肉香味和焙烤味稍弱，但其具備水果清香。
酸類物質主要呈現的是酸味，在風味劑中主要起調和口感的作用(宋詩清等，2019)。酸味有利於改善寵物食品的適口性，且酸味也是貓喜歡的風味。風味劑A、B、C中的酸類物質的含量相差不大，分別含有447.36、436.34、403.32 ng/g。說明三種風味劑的口感上沒有顯著差異。
烴類中的烷烴類通常被認為對風味並沒有顯著的影響，烯烴類物質容易被氧化分解，產生低分子烴類、醇類及含羰基礎類別風味成分(謝廣傑，2017)。風味劑A中未檢出烯烴類物質，而風味劑B和C中分別檢測出苯乙烯和檸檬烯。苯乙烯具有香脂香，檸烯具有檸檬味的特殊香味，能夠給人愉悅感，但是目前對寵物鮮見研究。
酮類為烷烴類有機化合物氧化的最終產物，是美拉德反應產物中的典型呈味物質(Wang等，2018)。三種風味劑中均含有羥基丙酮、菊苣酮，分別具有焦糖味和烤肉味。
0 3
結論
本研究分別采用雞肝、雞腸、雞肉的水解蛋白作為蛋白質受質，透過美拉德反應制備得到寵物風味劑A、B、C。
結果表明，三種風味劑A、B、C的分子品質分布基本<1000 Da，該肽段的美拉德反應活性最強。
共檢測出17種遊離胺基酸，其中風味劑A中鮮味、甜味胺基酸含量較高，風味劑B中的含硫胺基酸含量最高，是其肉香味形成的重要來源。
透過GC-MS分析發現，揮發性風味成分含量風味劑B＞風味劑C＞風味劑A， 風味劑B中含有多種醛類、醇類以及雜環類物質，呈現出濃郁的肉香味、脂肪味，且比風味劑A和風味劑C明顯 。研究成果可為新型寵物風味劑的開發提供理論參考。
另外，本試驗只采用儀器分析的方式對三種風味劑的風味特征進行分析，尚未對其在寵物中套用進行相關探索，今後可進行深入探究進一步驗證。
進口寵物食品流程
第一步，確認生產廠家是否在海關總署批準的輸華準入名單，目前已經有21個國家及地區批準 了輸華準入名單：共有荷蘭、法國、比利時、德國、丹麥、捷克、義大利、美國、加拿大、巴西、阿根廷、紐西蘭、澳洲、奧地利、西班牙、泰國、菲律賓、中國台灣，烏茲別克、吉爾吉斯，波蘭，而俄羅斯和塞爾維亞也簽署了寵物食品衛生協定，即將公布輸華企業名單。需要申請的企業可以抓住時機。
第二步、如果是寵物主糧和寵物保健品，需要申請農業部進口飼料登記證。
第三步、發貨之前生產廠家需要申請原產地證，衛生證。
第四步、確認其他清關所需資質，如進口企業的進口飼料備案，進境動植物檢疫授權證，合約，fp，裝箱單等。
第五步、要確保進口的寵物食品原料不含有【禁止進口動物疫病流行國家及地區的產品名單】
滿足以上條件，就可以一般貿易進口寵物食品。
